Implantationstest
1. Biologische Wirkung: Implantationstest
2. Bearbeitungszeit: 6 Wochen (nach Genehmigung durch die lokale Ethikkommission)
3. Anforderungen an die Probe:
USP
individuell zu bestimmen;
4. Tierzahl: 2 Kaninchen oder 5 Ratten
USP <88>
Der Implantationstest ist für die Bewertung von Kunststoffen und anderen polymeren Materialien in direktem Kontakt mit lebendem Gewebe vorgesehen. Von Bedeutung sind die ordnungsgemäße Aufbereitung der Implantatstreifen und deren ordnungsgemäße Implantation unter aseptischen Bedingungen.
1) Intramuskuläre Implantation bei Kaninchen
Versuchstiere
Gesunde, ausgewachsene Kaninchen mit einem Gewicht von mindestens 2,5 kg und ausreichend großen paravertebralen Muskeln für die Implantation der Teststreifen auswählen. Es darf kein anderes Muskelgewebe als die paravertebrale Stelle verwendet werden. Die Tiere müssen mit einem handelsüblichen Narkosemittel so tief betäubt werden, dass Muskelbewegungen, wie z. B. Zuckungen, verhindert werden.
Verfahren
Führen Sie den Test in einem sauberen Bereich durch. Am Tag des Tests oder bis zu 20 Stunden vor dem Test das Fell der Tiere auf beiden Seiten der Wirbelsäule scheren. Entfernen Sie lose Haare mit einem Staubsauger. Tupfen Sie die Haut leicht mit verdünntem Alkohol ab und trocknen Sie die Haut vor der Injektion. Implantieren Sie vier Streifen der Probe in den paravertebralen Muskel auf einer Seite der Wirbelsäule von jeweils zwei Kaninchen, 2,5-5 cm von der Mittellinie entfernt und parallel zur Wirbelsäule, und etwa 2,5 cm voneinander entfernt. In ähnlicher Weise implantieren Sie zwei Streifen USP High-Density Polyethylen RS in den gegenüberliegenden Muskel jedes Tieres. Führen Sie ein steriles Stilett in die Nadel ein, um den Implantatstreifen im Gewebe zu halten, während Sie die Nadel zurückziehen. Wird nach der Implantation eines Streifens eine übermäßige Blutung beobachtet, ist ein zweiter Streifen an einer anderen Stelle zu implantieren.
Beobachtung
Die Tiere werden mindestens 120 Stunden lang gehalten und am Ende des Beobachtungszeitraums durch Verabreichung einer Überdosis eines Narkosemittels oder anderer geeigneter Mittel geopfert. Lassen Sie genügend Zeit verstreichen, damit das Gewebe ohne Blutung geschnitten werden kann. Untersuchen Sie makroskopisch den Bereich des Gewebes, der den mittleren Teil eines jeden Implantatstreifens umgibt. Verwenden Sie eine Vergrößerungslinse und eine Hilfslichtquelle. Beobachten Sie die Implantatstellen der Probe und der Kontrolle auf Blutungen, Nekrosen, Verfärbungen und Infektionen und notieren Sie die Beobachtungen. Messen Sie die Verkapselung, falls vorhanden, indem Sie die Breite der Kapsel (von der Peripherie des vom Kontroll- oder Probenimplantat eingenommenen Raums bis zur Peripherie der Kapsel) auf die nächsten 0,1 mm gerundet aufzeichnen.
Bewertung
Berechnen Sie die Unterschiede zwischen den Durchschnittswerten für die Proben- und Kontrollstellen. Die Anforderungen des Tests sind erfüllt, wenn die Differenz nicht mehr als 1,0 beträgt oder wenn die Differenz zwischen den Durchschnittswerten von Probe und Kontrolle für mehr als eine der vier Implantationsstellen bei keinem der implantierten Tiere 1 übersteigt.
2) Subkutane Implantation bei Ratten
Versuchstiere
Auswahl gesunder Ratten mit einem Gewicht zwischen 225 und 350 g zum Zeitpunkt der Implantation.
Verfahren
Führen Sie den Test in einem sauberen Bereich durch. Betäuben Sie das Tier, bis eine chirurgische Ebene erreicht ist. Das Fell der Tiere auf beiden Seiten der Wirbelsäule kürzen. Entfernen Sie lose Haare mit einem Staubsauger. Reinigen Sie den geschorenen Bereich mit Povidon-Jod-Lösung. Führen Sie unter aseptischen Bedingungen zwei Mittellinienschnitte (ca. 1,0 cm lang) durch die Haut in der kranialen und kaudalen Region auf der Dorsalfläche durch. Die Faszien, die die Haut mit dem Muskel verbinden, mit stumpfer Dissektion durchtrennen, um eine Tasche unter der Haut seitlich der Inzision zu bilden (Basis der Tasche etwa 20 mm von der Implantatlinie entfernt). In jede Tasche eine sterile Probe einlegen und die Inzision mit Wundklammern oder Nähten verschließen. Implantieren Sie je zwei Test- und zwei Kontrollproben in fünf Ratten. Halten Sie die Tiere mindestens sieben Tage lang und töten Sie sie am Ende des Beobachtungszeitraums durch CO2-induzierte Hypoxie oder Verabreichung einer Überdosis eines Narkosemittels. Lassen Sie genügend Zeit verstreichen, damit das Gewebe ohne Blutung geschnitten werden kann. Schneiden Sie die Haut (Dorsalfläche) der Länge nach auf und legen Sie sie zurück. Untersuchen Sie den Bereich des Gewebes, der das Implantat umgibt, sorgfältig makroskopisch. Schneiden Sie die Probe in zwei Hälften und entnehmen Sie sie für eine genaue Untersuchung des Gewebes, das in direktem Kontakt mit der Probe steht. Verwenden Sie gegebenenfalls eine Vergrößerungslinse und eine zusätzliche Lichtquelle.
Beobachtung
Beobachten Sie die Implantatstellen der Probe und der Kontrolle auf Blutungen, Nekrosen, Verfärbungen und Infektionen und notieren Sie die Beobachtungen. Messen Sie die Verkapselung, falls vorhanden, indem Sie die Breite der Kapsel (von der Peripherie des vom Kontroll- oder Probenimplantat eingenommenen Raums bis zur Peripherie der Kapsel) auf die nächsten 0,1 mm gerundet aufzeichnen.
Bewertung
Berechnen Sie die Unterschiede zwischen den Durchschnittswerten für die Stichproben- und die Kontrollstandorte. Die Anforderungen des Tests sind erfüllt, wenn die Differenz nicht mehr als 1,0 beträgt.
